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mIHC多重荧光检测试剂盒详情


mIHC/多重荧光检测试剂盒,其原理是利用TSA技术(Tyramide Signal Amplification,酪胺信号放大技术),一种基于酶促反应的免疫检测信号放大方法,核心是利用辣根过氧化物酶(HRP)催化酪胺衍生物沉积,实现靶分子信号的高效增强;通过循环染色策略,突破传统IHC/IF靶标数量限制,实现对细胞/组织样本中多个靶蛋白的精准、高效、多重标记。

 

核心原理

 

1. 特异性靶向结合:将偶联了HRP的特异性抗体与样本中的靶分子特异性结合,形成“靶分子-一抗-HRP标记二抗”的复合物。

2. 酶促激活与荧光沉积:向体系中加入荧光/显色基团标记的酪胺衍生物(Tyramide Conjugate),HRP在过氧化氢(H2O₂)存在下,催化酪胺衍生物发生氧化反应,生成高活性的酪胺自由基。

3. 信号放大:活性酪胺自由基会迅速与周围的蛋白质(主要是靶分子附近的酪氨酸残基)共价结合,实现大量荧光/显色分子在靶标位点的“原位沉积”,实现信号的高效放大,显著提升靶蛋白的检出灵敏度。

 

 

 

循环染色实现多重荧光标记

 

1. 抗体剥离与信号保留:完成首个靶蛋白的染色与信号放大后,通过抗体剥离环节,特异性剥离与靶标及HRP聚合物呈非共价结合的一抗(含抗体复合物),而此前通过共价键连接于组织蛋白上的酪胺-荧光团复合物保持稳定,荧光信号持续保留。

2. 多靶标循环检测:针对下一个待检靶蛋白,重复上述“特异性抗体结合→TSA信号放大→抗体剥离”流程,且每次循环采用不同荧光团标记的酪胺衍生物,确保各靶标荧光信号可区分。

3. 优化检测顺序:根据不同靶蛋白的表位特性(如稳定性、丰度),合理规划检测顺序,避免后续染色对已标记表位造成干扰,保障每个靶标的检测特异性与信号质量。

 

 

产品核心优势

 

一、检测性能卓越:高特异性、高灵敏度、低背景

 

采用多聚体酶标记技术,以聚合物为载体链结合二抗,具备双重核心优势:

 

 

- 提升检测效能:载体链可标记多个HRP酶分子,显著增强检测特异性与灵敏度,信号放大倍数可达10-1000倍,能检测到低丰度(传统方法难以检出)的靶分子。同时信号仅在HRP作用的靶标位点沉积,降低背景干扰,结果更精准。

- 突破种属限制:可同时结合兔、鼠来源一抗,实现“兔/鼠通用”,适配性更强。

-兼容性强:可与免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)等多种检测技术结合使用,兼容性强。

 

二、实验流程优化:操作极简,效率倍增

 

通过技术整合,大幅简化传统实验步骤,降低操作门槛与时间成本:

 

1. 酶标二抗法简化:相较于ABC法、SP三步法,无需进行内源性生物素标记,步骤更精简。

2. 脱蜡修复一体化:省去通风橱与传统脱蜡修复缸,将“三次二甲苯脱蜡、三到五次梯度乙醇水化、抗原修复”三步整合为单一溶液操作,流程更高效。

3. 染色封片二合一:将DAPI染色与抗淬灭封片功能整合为一种溶液,减少试剂更换与操作环节。

 

三、检测能力升级:支持多标多色,灵活适配

 

满足多指标同步检测需求,适配不同实验设计:

 

- 多色检测一站式实现:配套多种荧光染料标记的Tyramide(用于靶蛋白染色)与DAPI(用于细胞核染色),可同时完成多个指标的多色检测,直观呈现复杂样本信息。

- 一抗选择无种属约束:搭配HRP多聚合抗兔/鼠二抗,一抗可自由选用兔源或鼠源,无需受限于单一物种,实验设计更灵活。

试剂盒荧光搭配:

参考文献:

Title:Pan-cancer spatially resolved single-cell analysis reveals the crosstalk between cancer-associated fibroblasts and tumor microenvironment(Quadruple-labeling with Five Colors)

Journal:Molecular Cancer ( IF:37.3)

Cardiac-specific deletion of BRG1 ameliorates ventricular arrhythmia in mice with myocardial infarction(Triple-labeling with Four Colors)

Journal:Acta Pharmacologica Sinica (IF 8.2)

 

 

 

SUMOylated IL-33 in the nucleus stabilizes the transcription factor IRF1 in hepatocellular carcinoma cells to promote immune escape(Triple-labeling with Four Colors)

Journal:Science Signaling(IF 9.5)

 

 

 

Pulmonary interleukin 1 beta/serum amyloid A3 axis promotes lung metastasis of hepatocellular carcinoma by facilitating the pre-metastatic niche formation (Dual-labeling with Three Colors)

Journal:JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH(IF 11.3)


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