细胞死亡机制研究是解码生命稳态调控规律、解析重大疾病病理本质、构建创新治疗体系的核心枢纽，其意义贯穿基础生命科学、疾病机制研究与临床转化医学三大领域：
在基础层面，它揭示了胚胎发育（如指间细胞凋亡介导指趾分化）、成体组织稳态（如每日百亿级衰老 / 受损细胞清除）及天然免疫防御（如焦亡介导病原体清除）的底层逻辑，填补多细胞生物复杂调控网络的认知空白；
在疾病层面，细胞死亡异常是癌症（肿瘤细胞逃逸凋亡、适应新型死亡抗性）、神经退行性疾病（神经元过度凋亡 / 坏死性凋亡）、炎症性疾病（焦亡 / 坏死性凋亡引发炎症失控）的共性病理基础，为阐明病因提供关键靶点；
在临床层面，其直接推动治疗创新，既催生了 Bcl-2 抑制剂（治疗慢性淋巴细胞白血病）、GPX4 抑制剂（诱导肿瘤铁死亡）等落地或在研药物，又能绕开传统治疗耐药性、提升治疗特异性，为解决人类健康关键问题与临床难题提供根本理论支撑与技术路径。
细胞凋亡是最经典的程序性死亡，WB 检测需重点关注Caspase 家族激活、Bcl-2 家族平衡及线粒体通路标志物，核心是区分 “全长（非活性）” 与 “切割片段（活性）”。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
执行型 Caspase | Caspase-3、Caspase-7 | 需检测切割片段（Caspase-3：17/19 kDa，全长 32 kDa），推荐用含 SDS 的裂解液避免人工激活。 |
启动型 Caspase | Caspase-8、Caspase-9 | Caspase-8（外源性通路，切割片段 43/41 kDa）；Caspase-9（内源性通路，切割片段 37 kDa）。 |
Bcl-2 家族 | Bcl-2、Bax、Bak | 重点看Bax/Bcl-2 比值（促凋亡 / 抗凋亡）；Bak 需用非还原性电泳检测寡聚化状态。 |
线粒体释放因子 | 细胞色素 C（Cytochrome C） | 需做亚细胞分级（分离线粒体 / 胞质组分），仅胞质中检测到信号才提示凋亡激活。 |
凋亡晚期标志 | PARP-1 | 检测切割片段（89 kDa，全长 116 kDa），可同时识别全长与片段的抗体更准确。 |
辅助标志物 | Smac/DIABLO、XIAP | Smac（胞质积累提示线粒体损伤）；XIAP（凋亡抑制蛋白，下调可辅助验证凋亡）。 |
焦亡核心是Gasdermin 家族切割与炎症因子释放，WB 需聚焦 “孔道形成蛋白” 和 “Caspase 炎症亚型”，同时需结合炎症因子检测。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
关键执行蛋白 | GSDMD、GSDME | GSDMD（切割片段 31 kDa，全长 53 kDa）；GSDME（切割片段 35 kDa，全长 50 kDa），是焦亡特异性标志。 |
炎症 Caspase | Caspase-1、Caspase-4/5/11 | Caspase-1（切割片段 20/10 kDa，全长 45 kDa）；Caspase-4/5/11（切割片段 20 kDa 左右）。 |
炎症因子 | IL-1β、IL-18 | 需检测成熟型（IL-1β：17 kDa，前体 31 kDa；IL-18：18 kDa，前体 24 kDa），常需结合 ELISA 验证。 |
辅助标志物 | NLRP3 | 检测蛋白表达量（全长 110 kDa），需注意其活化依赖寡聚化，WB 仅能反映表达水平，需结合免疫共沉淀辅助。 |
坏死性凋亡是 “Caspase 非依赖” 的炎性死亡，WB 核心是RIPK3-MLKL 通路激活，重点检测 “磷酸化修饰”（活性形式）。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
核心激酶 | RIPK1、RIPK3 | 需检测磷酸化形式（p-RIPK1：Ser166；p-RIPK3：Ser227/Thr231），总蛋白表达量参考价值低。 |
执行蛋白 | MLKL | 关键看磷酸化 MLKL（p-MLKL：Ser358），活性形式会向细胞膜转位，可做亚细胞定位辅助。 |
辅助标志物 | Caspase-8 | 检测全长（55 kDa），坏死性凋亡时 Caspase-8 活性被抑制，无切割片段（避免与凋亡混淆）。 |
铁死亡是 “铁依赖 - 脂质过氧化” 介导的死亡，WB 无 “切割片段” 标志，需检测关键调控蛋白表达及 “脂质过氧化相关分子”。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
核心调控蛋白 | GPX4、SLC7A11 | GPX4（22 kDa，表达下调是铁死亡核心标志）；SLC7A11（55 kDa，抑制后诱导铁死亡）。 |
脂质代谢相关 | ACSL4、LPCAT3 | ACSL4（72 kDa，促进脂质过氧化）；LPCAT3（50 kDa，维持膜脂组成，下调敏感）。 |
铁代谢相关 | FTH1、TFR1 | FTH1（21 kDa，铁储存蛋白，下调导致铁释放）；TFR1（90 kDa，铁摄取蛋白，上调提示铁积累）。 |
辅助标志物 | Nrf2 | 抗氧化通路关键因子（65 kDa，铁死亡时激活，表达上调）。 |
铜死亡是 “铜依赖 - 线粒体代谢异常” 死亡，WB 需关注FDX1 - 脂酰化蛋白通路及 “线粒体 TCA 循环相关蛋白”。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
核心调控因子 | FDX1、LIAS | FDX1（20 kDa，铜毒性关键介导因子，敲除可挽救铜死亡）；LIAS（50 kDa，脂酰合酶，下调抑制脂酰化）。 |
脂酰化相关蛋白 | DLAT、PDHA1 | DLAT（51 kDa，TCA 循环蛋白，铜结合后聚集，可检测可溶性 / 不溶性组分）；PDHA1（43 kDa，脂酰化下调）。 |
铜转运蛋白 | SLC31A1、ATP7A/B | SLC31A1（35 kDa，铜输入蛋白，过表达增强铜敏感性）；ATP7A/B（160 kDa，铜输出蛋白，下调导致铜积累）。 |
辅助标志物 | HSP70 | 热休克蛋白（70 kDa，铜死亡时蛋白毒性应激，表达上调）。 |
自噬是 “溶酶体降解” 过程，WB 核心是LC3 lipidation（脂化） ，需区分 “LC3-I（游离）” 与 “LC3-II（膜结合）”。
标志物类别 | 具体蛋白 / 分子 | WB 检测要点 |
核心标志 | LC3B | 检测 LC3-I（18 kDa）与 LC3-II（16 kDa），LC3-II/LC3-I 比值升高提示自噬激活；需用 PE 抗体增强信号。 |
自噬调控蛋白 | Beclin1、ULK1 | Beclin1（60 kDa，自噬起始关键因子，上调促进自噬）；ULK1（150 kDa，检测磷酸化形式 p-ULK1：Ser555）。 |
自噬底物 | p62/SQSTM1 | 48 kDa，自噬激活时被降解，表达下调；若与 LC3-II 同时升高，提示自噬流受阻。 |
溶酶体相关 | LAMP1 | 110 kDa，溶酶体膜蛋白，表达上调提示溶酶体活性增强，辅助验证自噬流。 |
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